（1）指示植物培养在5月中旬播种普通烟、德伯尼烟和心叶烟，播种上述烟草种子，5天之后种植杨酸浆，再过5天种植黄花烟和白花刺果曼陀罗，最后种植千日红。
先用肥皂水洗净播种用的花盆，然后将所用的沃土过筛并混合均匀，将其放在160~180℃的灭菌器中进行2小时的干热灭菌工作，放在小、中、大花盆中，盆顶和土面之间要有一定的距离，先将花盆内的土浇透水。将种子撒播在盆内的湿土上，土厚0.5~1厘米。6月上旬进行整棚、遮阴、培土、在棚里喷药和地面灌水工作。在6月中旬种植各类指示作物，育苗工作要在阴凉处进行。
（2）收集病毒组织通过指示植物检测生长的马铃薯植株是否带有病毒，分别在现蕾期和开花期到田间采集植株叶片。通常将整个植株的中部叶片作为检验材料，也能够检验块茎及脱毒苗带病毒的情况。
（3）为指示植物接种检验病毒通常用常规汁液摩擦接种法接种马铃薯S病毒、Y病毒和X病毒，而用蚜虫（桃蚜）接种法接种卷叶病毒。用肥皂水洗涤研钵、研锤，并要洗净双手，将采到的病叶放在干净的研钵里研磨成浆液，然后使用小型喷粉器在指示植物的叶片上喷400目的金刚砂，将病叶匀浆摩擦接种在不同的指示植物上，重复2~3次。接过种之后，用清水将接种叶洗干净，然后用无菌水进行清洗，挂上牌，保持棚温在20~25℃，湿度在85%~90%.接种后3~7天开始记录温、湿度，并加大湿度，逐日观察病叶的症状。及时除去杂草，每5~7天用1次预防蚜虫的药。依据指示作物和病毒协同的发病时间、部位及症状，调查3次，与空白比较，将结果记录下来。
（三）制备培养基
马铃薯的茎尖培养一般采用MS培养基。概述如下。
1.培养基含有的成分
（1）大量元素每升培养基含有硝酸钾1900毫克、硝酸铵1650毫克、氯化钙440毫克、硫酸镁370毫克、磷酸二氢钾170毫克、乙二胺四乙酸二钠37.3毫克和硫酸亚铁27.8毫克。
（2）微量元素每升培养基含有硫酸锰22.3毫克、硫酸锌8.6毫克、硼酸6.2毫克、硫酸铜0.025毫克、碘化钾0.83毫克、钼酸钠0.25毫克以及氯化钴0.025毫克。
（3）有机成分每升培养基含有蔗糖30000毫克、琼脂8000毫克、肌醇100毫克、腺嘌呤5毫克、甘氨酸2毫克、吲哚乙酸1毫克（或1~30毫克/升）、6-苄基腺嘌呤1毫克（或0.04~10毫克/升）、维生素B60.5毫克、烟酸0.5毫克、维生素B10.1毫克，最后调整氢离子浓度是1995纳摩尔/升（pH值为5.7）。
2.配制方法
（1）将大量元素配成10倍母液将300毫升蒸馏水加入1000毫升的容量瓶里，然后加入一种元素，等溶化之后加入另一种元素，以此类推，先后加入19克硝酸钾、1.7克磷酸二氢钾、16.5克硝酸铵和3.7克硫酸镁，全溶后加蒸馏水至500毫升，再加入4.4克氯化钙，待溶解之后加入蒸馏水至1000毫升，就成为了10倍母液。制作1000毫升培养基需要100毫升母液，也就是每升培养基中各元素的需要量。
在配制10倍母液的过程中，也可以将各种元素分别溶于100毫升容器里，待全部融化时，倒入1000毫升的容量瓶中，定容到1000毫升，使用蒸馏水进行溶解和定容。如果需母液量多，就可以将每种元素和蒸馏水同步加倍。配制好的母液若不马上使用，则要放于冰箱下部不结冰的位置或冷凉的地方。
（2）单用铁盐配成100倍母液就是将2.78克硫酸亚铁溶解于100毫升蒸馏水中，在100毫升蒸馏水中放入乙二胺四乙酸二钠3.73克，经过加热溶解后倒入硫酸亚铁，待冷却时倒进容量瓶中，加蒸馏水至400毫升。调整氢离子浓度至3163纳摩尔/升（pH值为5.5）。使用的时候，每配1000毫升培养基，需要4毫升母液。
（3）用微量元素配100倍母液在100毫升的容量瓶中加入50毫升蒸馏水，分别加入2.23克硫酸锰、0.86克硫酸锌、0.62克硼酸、0.083克碘化钾、0.0025克硫酸铜、0.0025克氯化钴以及2.23克硫酸锰，待一种溶解后再加入另一种，全溶后加蒸馏水至100毫升，就制成了100倍母液。每1000毫升培养基需要加入母液1毫升。
（4）用有机成分配100倍母液在100毫升的容量瓶加入50毫升蒸馏水，先用少量热水溶解0.5克腺嘌呤，然后倒入瓶中。
将0.2克甘氨酸溶于少量浓度为1摩尔/升的盐酸中，分别将易溶于水的肌醇10克、烟酸0.05克、维生素B10.01克、维生素B60.05克、吲哚乙酸0.1克和0.1克6-苄基腺嘌呤溶于上面提到的容量瓶里，加入蒸馏水直至100毫升，就是100倍母液了。每配制1000毫升培养基，需要加入1毫升母液。
配好上述各种母液后，在配制培养基时，首先考虑培养基的用量。如按照每个15厘米×2厘米规格的试管放10毫升，每个100毫升的三角瓶放25毫升来算的话，1000毫升的培养基可装100个试管或40个三角瓶。培养基的用量确定之后，按总量3/4的蒸馏水加入需要量的蔗糖以及琼脂，然后加热，使其溶解。如果配制的培养基是液体，就不用加热了，这是因为不用琼脂时，蔗糖在一般室温下易溶解。加热溶解的琼脂和蔗糖等温度下降到40℃时，按照制成1000毫升培养基所需要的母液用量来分别加入，然后加入蒸馏水至定容量，搅拌充足后，用1摩尔/升的氢氧化钠或盐酸将氢离子浓度调到1585纳摩尔/升（pH值为5.8），然后分别放在三角瓶或者试管中，使用高压锅进行消毒。消毒过程中，当压力上升至49.03千帕时，打开放气阀，放出冷气，然后关阀，等压力升到104千帕时，保持15~20分钟，就可以实现灭菌的目的。消毒时间不要过久，否则会改变培养基的成分。灭菌之后的三角瓶或者试管放在无菌室内，供茎尖培养或脱毒苗繁殖时使用。没有用完的各种母液仍进行冷藏。
（四）茎尖培养方法
1.消毒材料
可以用植株分枝或腋芽来获取茎尖。不过使用的更多的是块茎上的嫩芽，这是因为很难对植株腋芽彻底消毒，容易污染。块茎上的幼芽长约4厘米，在幼叶还没有展开的时候切取（由于老芽容易分化成花芽，所以不能使用老芽）。在进行剥取茎尖工作之前，先对选择的芽段消毒，可将芽放入烧杯中，用纱布封口，放于自来水池中冲洗30分钟，取出后蘸一下95%的酒精，再在5%的次氯酸钠溶液里浸泡20分钟，然后使用蒸馏水洗3~4次，这样就可以拿到无菌室进行剥取茎尖工作。
2.消毒无菌室
应当在无菌室里的超净工作台上完成茎尖的剥取工作。要对无菌室消毒，以避免有杂菌。通常用5%的石碳酸水进行全面喷雾，还要用紫外线灯照射超过半小时。为了身体健康，工作人员在关闭紫外线灯20分钟后，才可以进去（开关在室外）。要提前打开超净工作台，过半个小时再工作。工作人员进入无菌室前，要将手表、手镯、戒指等放在室外，穿上消过毒的帽子、鞋、工作服和口罩。进入无菌室之前要用肥皂洗净手和手腕，然后用70%的酒精棉球擦手和工作台上的用具，最后开始工作。
3.剥离茎尖和接种
将已经消毒处理的芽段放在位于超净工作台上的30~40倍的解剖镜下，使用解剖针将芽顶嫩叶一层一层剥去，在露出1~2个叶原基和生长锥时，用自制的长把刀或解剖刀切下带1~2个叶原基的长0.2~0.3毫米的生长锥，马上在试管内的培养基上进行接种，一个试管只接种1个茎尖，记得为试管编上号，以利于检查成苗。完成接种后要在工作日志上注明接种品种、管数、日期及原茎尖带病毒种类等。
必须对接种时用过的刀具和解剖针进行严格消毒，应当准备2个刀具、2个解剖针。开始时将2个用具放在有酒精的杯中，用时取出1个，剥完1个茎尖后用酒精灯烧一下刀具和解剖针放到酒精杯里，剥第二个时换1个刀具和解剖针。为了防止病毒污染。
要轮流使用接种工具。
4.茎尖培养
在培养室内培养接种后的茎尖试管。保持20~25℃的室内温度，每日16小时光照，光照强度在2000~3000勒克斯。茎尖成活后约1个月通常就可以看到长势很明显。如果叶原基形成小叶后没有生根，可将茎尖转入无生长调节剂的培养基上，小苗就能快速形成根系。大约培养4个月，茎尖可以发育成小的植株。当小植株有4~5个节时，单节切段，接种到三角瓶或试管里的培养基上，也要标上编号。大概过30天再把试管或三角瓶中的小植株单节切段接种到3~4个三角瓶里。当瓶里的苗长到10厘米高时，直接检测2~3瓶苗的病毒情况，也可以移栽到温室供病毒检测，留一瓶（1司样编号的）在培养室内保存着。经过检测确实没有任何病毒的试管苗，才能认定为无毒苗，这种苗才可以进行繁殖利用。只要检测出茎尖苗有病毒，一律淘汰，并立即汰除培养室中保存的同样编号的试管苗。
5.茎尖培养时的注意事项
①接种茎尖后生长锥没有生长，或者生长点变为褐色并死亡。这是由于生长点在剥茎尖时受到了伤害，接种后无法恢复而死亡。故一定要细心地剥茎尖，针尖不能伤及生长点。
②茎尖在培养过程中长得很慢，接种1个月没有生长，只有一点绿色。这主要由萘乙酸浓度不足造成，应转入萘乙酸含量大于0.5毫克/升的培养基上培养，还要使培养室温度保持25℃左右，以利于茎尖生长。
③生长锥正常生长，茎尖基部没有生根或者愈伤组织。此时要将茎尖转到不含生长激素的培养基上，并将室温降到18~20℃，以利于根的分化。
④越小的茎尖，越容易形成愈伤组织，分化成苗花费的时间就越久，通常要4~5个月。长0.2~0.3毫米的茎尖分化成苗的时间约为3个月，但由于品种不同会有差别，有的成苗需要7~8个月。需要注意，在形成愈伤组织后分化的苗常常会发生变异。
所以，要经过品种典型性比较证明这种茎尖苗没有发生变异，才能按原来的品种应用。
另外，茎尖培养也可分为两个阶段。第一阶段，用MS加0.1毫克/升浓度的赤霉素溶液的培养基，在培养2~3周茎尖增长很明显时，进入第二阶段的培养。
第二阶段，将茎尖转到MS培养基上，什么生长激素都不加。
保持温度在20~25℃，光照度2000~3000勒克斯，1~2个月后慢慢长成小植株。
二、茎尖脱毒率的提高
依据细胞分化、植物组织生长发育的特性和利用高温、药剂进行处理，可以降解、钝化病毒和抑制病毒繁殖的作用，在培养茎尖脱毒时，两者结合处理有很好的效果。
（1）高温处理侵染马铃薯的病毒对温度有不一样的反应。
对患病毒病的马铃薯块茎幼芽或植株进行高温处理后，开始茎尖培养，这样脱毒率比较高。1981年山西省农科院对S3012品系的块茎进行37℃的高温处理，20天后所有植株均没有出现卷叶病，但处理15天的卷叶病株率为19%，未处理的卷叶病株率为100%.
侵染马铃薯的Y病毒、X病毒对温度有完全不同的反应。最适宜X病毒在植株中繁殖的温度是20~24℃，当温度为25~28℃时病毒浓度会降低，病症减轻。而最适宜Y病毒繁殖的温度是28℃，在31℃的温度下仍能转移。当X病毒、Y病毒同时侵染植株时，Y病毒不会受X病毒影响，但因有Y病毒存在，X病毒不仅浓度增高、毒性加强，而且还可借Y病毒增大侵染的范围。因此X病毒、Y病毒同时侵染会加重植株病害，使产量大幅度减少。有报道称，纺锤块茎类病毒适宜在高温下繁殖，因此高温处理不适于纺锤块茎类病毒。科学家将有这种病毒的块茎保存在4℃条件下3个月，然后在10℃环境中生长6个月，这种植株使用茎尖培养再脱毒，效果较好。
（2）药剂处理药剂可以减少病毒的繁殖，可以提高茎尖的脱毒率。霍林斯曾经说过，嘌呤和嘧啶的有些衍生物如2-硫脲嘧啶、8-氮鸟嘌呤等可以结合病毒粒子，使一些病毒无法繁殖。谢巴德曾在培养基中加入10毫克/升的病毒唑，然后培养带有X病毒的烟草愈伤组织，可以分化出大量不带X病毒的植株，523个再生植株中只有33个有X病毒。仍用这种培养基培养带有Y病毒的烟草原生质体愈伤组织，会将Y病毒脱除。瓦姆布谷等人也用浓度不等的病毒唑处理长3~4毫米的马铃薯茎尖（腋芽），20周后，Y病毒和S病毒被除去，在培养基中加入20毫克/升的病毒唑，能脱除多于90%的S病毒和85%的Y病毒。用上述药剂处理患病毒的材料，效果都很好，尤其是病毒唑属于一种核苷结构的类似物，放到培养基中可以抑制病毒，在培养的茎尖长到3~4厘米时，脱毒率依然很好，所以这种药剂很有前途。
